Amplificación del ADN de la subunidad-1 del receptor N-Metil-D-Aspartato (NMDAR-1) en el hipotálamo ovino mediante la técnica de RT-PCR

Abstract

El receptor N-metil-D-aspartato (NMDAR), uno de los principales receptores de los aminoácidos excitatorios, ha sido involucrado en el control de la secreción de la hormona luteinizante (LH) al facilitar la liberación de la hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH). La capacidad del NMDAR para estimular la liberación de la LHRH está significativamente comprometida en animales castrados. En este estudio se plantearon tres objetivos: Primero, estandarizar las condiciones óptimas para re-amplificar el ADN de la subunidad-1 del NMDAR (NMDAR-1) en ovino. Segundo, determinar si existe diferencia en la distribución del ADN de la NMDAR-1 en los diferentes cuadrantes hipotalámicos del ovino no castrado y finalmente, determinar si las hormonas sexuales testiculares están involucradas en la expresión del NMDAR en el hipotálamo. El ADN de la NMDAR-1 procedente de cuatro cuadrantes del hipotálamo (cuadrantes dorsal-rostral, ventral-rostral, dorsal-caudal, y ventral-caudal) fue amplificado mediante la técnica de RTPCR. Las condiciones óptimas encontradas para amplificar el ADN de la NMDAR-1 fueron 1,5 mM CIMg2, 100 nM de los oligonucleótidos iniciadores y 59°C como temperatura de hibridación. No se observó efecto del cuadrante del hipotálamo sobre la expresión del ADN de la NMDAR-1 en el hipotálamo del ovino no castrado. La castración redujo (P < 0,05) la expresión del ADN para el NMDAR-1, comparado con la de animales no castrados. Estos resultados sugieren que el NMDAR-1 se encuentra distribuido ampliamente en el hipotálamo del ovino. Además, a través de estos resultados se puede presumir que la expresión del receptor NMDA en el hipotálamo del ovino está afectada por las hormonas sexuales esteroideas.