Análisis zimográfico de metaloproteasas y catepsina en hígado graso de pato criollo (Cairina moschata)

Abstract

La esteatosis hepática se define como una acumulación de triglicéridos en las células hepáticas, posterior a una dieta forzada rica en carbohidratos, y es una condición no patológica en palmípedos. El hígado esteatósico presenta una actividad metabólica mayor. La actividad proteásica en células de hígado de pato con esteatosis fue caracterizada por electroforesis. Tres tipos de homogeneizado (crudo, tratado para metaloproteasa y tratado para catepsina) fueron preparados a partir de ejemplares de hígado de pato, grasos y magros. El objetivo de este estudio fue introducir las técnicas de zimografía mono- y bi-dimensionales para caracterizar el perfil proteolítico presente en células hepáticas con esteatosis, con el fin de demostrar la factibilidad de esta técnica en determinar actividad proteolítica presente en hígado graso de manera semi-cuantitativa. La concentración proteica fue 30% mayor en extractos de hígado graso. Usando caseína como sustrato, la actividad proteolítica determinada a 280 nm fue 25% mayor en extractos de hígado graso. Las pruebas zimográficas empleadas permitieron resultados semicuantitativos, detectándose actividad catepsina y metaloproteasa usando geles de poliacrilamida copolimerizados con gelatina y cuantificados por densitometría. El uso de inhibidores específicos confirmó la identidad de las proteínas bajo estudio. Se determinó una actividad metaloproteasa con Mr ~90 ± 5 kDa y un pI de 5,55 ± 0,01; y una actividad catepsina de 38 ± 2 kDa con un pI de 4,40 ± 0,01. Los resultados confirmaron un aumento de estas actividades proteasas en los extractos de hígado esteatósico. El análisis de proteasas de hígado en patos con régimen de alimentación forzada pudiera elucidar el mecanismo involucrado en el desarrollo de la esteatosis.