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Título: Purificación y caracterización de la quimera plasminogeno (N-Terminal Del Kringle 1) Estreptokinasa, expresada en la levadura Pichia Pastoris
Autores: Perdomo Díaz, Balbino Antonio
Tutores: Bastidas V., Marco
Correo Electrónico: balper007@gmail.com
Resumen: La estreptokinasa (SK) es un potente activador de plasminogeno (Plg) y su uso clínico es ampliamente aceptado. Naturalmente es secretada por cepas de streptococcus hemolíticos, sin embargo la SK tiene como desventajas que es un fibrinolítico no específico, es decir no solo activa al Plg unido a la fibrina sino también al plasmático, induciendo así hiperplasminemia. Por ello en el laboratorio de biología y medicina experimental (LABIOMEX) de la Universidad de los Andes se desarrollo una SK hibrida extendida con el N-terminal del dominio Kringle 1 (K1) del Plg con el fin de purificarla en un solo paso por una columna de afinidad y además aumentar su especificidad al ser enlazada por la fibrina que forman los coágulos, esta es expresada por la levadura Pichia pastoris. Tras su caracterización la cual no había sido hecha se encontró que efectivamente la SK-K1 es purificada en un solo paso, eluyéndose con urea 4 M de una columna Lys-Sepharosa, su peso es de 52100 D, teniendo una KPlg de 0,479 una Vmax de 0,0027 µM/min. y una kcat de 231,6 seg-1. Tiene afinidad por la fibrina, siendo su KD de 0,9 µM, además es potenciada con fibrinogeno por debajo de 0,3 µM, su máxima actividad se evidencia entre pH 7,5 a 8,0 y en presencia de NaCl por debajo de 50 mM su actividad no presenta modificación.
Colación: 1-121
Grado: Licenciado en Biología
Fecha: 2006
País: Venezuela
Palabras Claves: Estreptokinasa
Plasminogeno
Kringle 1
Pichia pastoris
SK-K1
Institución: Universidad de Los Andes
URI: http://www.saber.ula.ve/handle/123456789/38753
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