Description of hutmannin-1, a new PIII-metalloprotease from the venom of the neotropical lansberg's hognose viper (Porthidium lansbergii hutmanni) with fibrino (Geno) lytic and haemorrhagic activities

Abstract

El objetivo de este trabajo fue caracterizar hutmannin-1 (hut- 1), una nueva metaloproteasa de clase P-III de ~ 62 kDa de la serpiente Porthidium lansbergii hutmanni (P.l.h) (Isla Margarita, Venezuela). Para caracterizar esta proteína, el veneno crudo de P.l.h se fraccionó mediante cromatografía de exclusión molecular, cromatografía de intercambio aniónico y cromatografía líquida del alto rendimiento (HPLC). Hutmannin-1 se identificó por espectrometría de masas MALDI-TOF / TOF, y el veneno se analizó por SDS-PAGE. Se determinó la letalidad, la dosis hemorrágica mínima (MHD), el efecto de la temperatura sobre la actividad, la actividad procoagulante en el plasma humano y las actividades anticoagulantes, desfibrinantes, fibrinolíticos gelatinolíticos y fibrinogenolíticos y de agregación plaquetaria de hut-1. Se realizaron ensayos de reconocimiento antigénico en P.l.h veneno crudo y hut-1 mediante suero anti-ofídico polivalente (PAOS) venezolano. Hut-1 tuvo una fuerte actividad fibrinolítica y fibrinolítica moderada. Estas actividades y la actividad hemorrágica de hut-1 fueron completamente inhibidas por ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). El veneno crudo de P.l.h tuvo una potente actividad anticoagulante en plasma recalcificado e inhibió la agregación plaquetaria inducida por trombina, ADP, colágeno y ristocetina. En contraste, la inhibición de la agregación plaquetaria, actividad anticoagulante y coagulante de hut-1 no se observó con ninguno de los agonistas. Este resultado sugiere que otras proteínas en el veneno crudo, afectan notablemente las funciones plaquetarias y / o los factores de coagulación. El antiveneno comercial venezolano mostró una capacidad limitada para neutralizar la actividad hemorrágica de la hut-1.